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土壤总磷/有机磷/无机磷含量测定试剂盒说明书
微量法 100T/96S
 
测定意义：
土壤总磷包括有机磷和无机磷，其中无机磷能够直接被植物利用。土壤有机磷经过矿化分解而转化为无机磷。同时测定土壤总磷、有机磷和无机磷，可以全面反映土壤磷营养状况。
 
测定原理：
利用钼蓝法定磷。取一份土样，通过浸提法测定土壤无机磷含量；另外取一份土样，经高温灼烧后，土壤有机磷转化为无机磷，测得土壤总磷含量；总磷含量减去无机磷含量，即可计算出有机磷含量。
 
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、可调式水浴锅，分析天平、可调式移液器、550℃高温电炉、蒸馏水、100 目筛子（可更小）。
 
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。临用前用蒸馏水稀释 10 倍后再用。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前配制，加入 8mL 蒸馏水，充分溶解后加入 4mL
试剂二，混匀。
标准品：液体×1 支，40 μg/ml 无机磷标准品，4℃保存。
 
土壤不同形态磷提取：
1.无机磷：称取通过 100 目筛子的风干土样 0.01g，转移到 1mL 离心管，加入 1mL 试剂一，震荡混匀，然后置于 45℃水浴 1h，8000rpm，离心 10min，取上清液一，用于无机磷含量测定。
 
2.总磷提取：取通过 100 目筛子的风干土样，550℃灼烧 1h，冷却后称取约 0.01g，转移到1 mL 离心管，加入 1mL 试剂一，震荡混匀，然后置于 45℃水浴 1h，8000rpm，离心 10min，取上清液二，用于总磷含量测定。
 
测定步骤：
1. 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。
2.打开水浴锅，调节温度到 40℃。
3. 空白管：取 EP 管，依次加入 100μL 蒸馏水，100μL 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A 空白管。
4. 标准管：取 EP 管，依次加入 10μL 标准液，90μL 蒸馏水，100μL 试剂三，混匀后置于40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A 标准管。
5. 测定管：取 EP 管，依次加入 10μL 上清液一或者上清液二，90μL 蒸馏水，100μL 试剂
 
三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A测定管。
 
土壤磷含量计算：
1.土壤无机磷含量（μg /g）=[C 标准液×(A 测定－A 空白)÷(A 标准－A 空白)]×V 总÷W=40×(A 测定－A 空白)÷(A 标准－A 空白)÷W
C 标准液：40 μg/ml； 
W：土壤样品质量，g； 
V 总：上清液一总体积，1 mL。
2.土壤总磷含量（μg/g）=[C 标准液×(A 测定－A 空白)÷(A 标准－A 空白)]×V 总÷W=40×(A 测定－A 空白)÷(A 标准－A 空白)÷W
C 标准液：40 μg/ml；
W：土壤样品质量，g；
V 总：上清液二总体积，1mL。
3. 土壤有机磷（μg /g）=土壤总磷-土壤无机磷
注意事项：
试剂三配制过程中，可能会产生黑色固体，其不影响结果，注意吸取时不要将黑色固体吸入。
 
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